酶联免疫斑点检测（Enzyme-Linked Immunospot Assay, Elispot）结合了Elisa技术和细胞培养技术，在单细胞水平监测细胞因子的分泌情况。其原理是用Elispot板上捕获抗体特异性结合细胞所分泌的因子，然后用斑点的形式呈现出来的一种方法。Mabtech的Elispot在全球的质量和性价比屈指可数。

1.酶联免疫斑点检测方法有如下优点：

1.1 灵敏度高，可以达到1/1000000,是非常灵敏的检测手段。比传统elisa要高2到3个数量级。

1.2 适合用于高通量筛选。分离的细胞不需要进行体外扩增，实验人员能够在同一次实验进行多块板的操作。

1.3 单细胞水平的检测，Elispot的技术能够检测到单个细胞分泌细胞因子的情况。

实验步骤： 

2.1 Mabtech的Elispot是在底物有pvdf膜的96孔板上实验。

分为两种板，一种需要客户自己包板的basic系列，另一种是已经包被好捕获抗体的pro和plus系列。

2. 2 在mabtech的elispot的板上加入细胞和各种刺激物共培养。在抗原特异性或者非特异性有丝分裂的影响下，数小时内，细胞就可以分泌各种细胞因子。

2.3 分泌的细胞因子能够被板上的包被抗体捕获，洗去板上的细胞。

2.4 加入生物素化的检测抗体能够和特异性的分泌因子结合。

2.5 Mabtech能够提供两种显色系统，HRP和ALP。针对hrp显色体系，加入辣根过氧化物标记的链霉亲和素。针对ALP显色体系，加入碱性磷酸酶标记的链霉亲和素。

两者的区别在于，ALP显色时间较长，但是斑点持久，实验完成后，斑点可以一直保存在膜上，随时可以观察。HRP系统显色时间较短，但是斑点在膜上很快会褪色，不利于长期保存。Mabtech建议客户可以选择ALP显色系统。

其原理见图1：

图1 ELISPOT流程示意图

2.6 每一个斑点都对应一个分泌该因子的细胞，通过Elispot读板仪计算每孔中的斑点数。Mabtech最新推出的的IRIS，与其他品牌的酶联斑点仪器相比，

IRIS具有如下优点：

2.6.1 操作简便，客户经过1-2个小时培训，能够熟练操作系统。

2.6.2 通过构建数学模型对每个点进行计算，使计数更加客观。

2.6.4 IRIS还能够用于荧光酶联斑点实验（fluorospot）结果的检测，且目前最多能够进行4种荧光的分析。基于对每个点3d立体分析，能够准确定位每个斑点的中心，有效计入每个实际的斑点，去掉非特异性斑点。

3. Elispot的应用和热销产品

3.1. 疫苗研发 很多疫苗研发的客户会选择酶联免疫斑点实验（Elispot）进行细胞情况的分析，比较热销的产品时人的IFN gamma，il-2和igG等指标。

3.2. 细胞治疗领域 通过Elispot试剂盒能够灵敏地监测免疫反应。主要的热销指标有：human IFN-gamma, Granzyme B，或者是TNF-alpha，IL-12/23等指标。

4. 当然如果有Flurospot可以一起检测以上几个指标，实验变得更加的简单和快速。Fluorospot还有其他的应用。

4.1 抗体亚型鉴定 Mabtech新推出的小鼠抗体亚型鉴定试剂盒，基于Elispot，快速鉴定IgG亚型。

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