PUREfrex® ——重组无细胞蛋白合成系统
PUREfrex®是一种基于PURE系统技术新开发的体外转录/翻译偶联系统，与S30体外翻译系统不同，PUREfrex®是重组无细胞蛋白合成系统，反应系统由蛋白质、核糖体、氨基酸和NTPs组成。只需将编码感兴趣蛋白质的DNA(或mRNA)与试剂盒中溶液I、II和III混合，37℃孵育反应数小时，即可完成蛋白质合成。构成PUREfrex®试剂盒的蛋白质、核糖体和tRNA的制备方法较原PURE体系有所改进，减少了与蛋白质合成无关的污染物质。且PUREfrex®试剂盒中所含的翻译因子和其他蛋白均不包含标签序列，后续可添加任何标签来纯化和检测合成的蛋白质。
〉参考文献
Shimizu et al. (2001) Nat. Biotechnol., vol. 19, p. 751. PubMed ID: 11479568
Shimizu et al. (2005) Methods, vol. 36, p. 299. PubMe ID: 16076456
〉产品特点
● 消除了细胞提取物中的杂蛋白，合成的表达产物分辨率更高；
● 可以同时加入多种模板进行反应，以合成Fab及多聚体；
● 可直接使用PCR产物来作为模板DNA；
● 单位体积内合成的蛋白量几乎恒定；
● 操作简便，37℃数小时即可合成；
● 所有的蛋白成分均不包含标签序列，可使用任何标签来纯化和检测合成的蛋白质；
● 可合成活细胞难以合成的强毒性蛋白。
〉PUREfrex®不同版本的选择
PUREfrex®2.0 - 蛋白质合成量更高，大大降低了RNase和ß-半乳糖苷酶的污染，并将每1µL反应混合物的脂多糖(LPS)水平降低至约0.1 EU。
PUREfrex®2.1 - 2.1版本试剂盒以2.0版本为基础，未预混还原剂。主要用于合成含有二硫键的靶蛋白。
PUREfrex®1.0 - 蛋白质合成量少于2.0和2.1版本，但1.0版本反应组分的完整信息已公开。
PUREfrex®1.0 Custom - 厂家可提供基于PUREfrex®1.0试剂盒的定制产品。
〉PUREfrex®2.0试剂盒
PUREfrex®2.0是PUREfrex® 1.0的优化版。大大减少了RNase和β-半乳糖苷酶的污染，此外，每1µL反应混合物的脂多糖(LPS)水平降低至约0.1 EU。与PUREfrex®1.0相比，蛋白质合成量提高了2-10倍。
图1. 合成原核及真核生物蛋白质的结果显示：与PUREfrex®1.0相比，使用PUREfrex®2.0合成时，以上6种蛋白质的合成量都有增加。
图2. 与原始PURE系统相比，PUREfrex®2.0大大减少了RNase和β-半乳糖苷酶的污染，此外，每1µL反应混合物的脂多糖(LPS)水平降低至约0.1 EU。PUREfrex®2.0组分的改进纯化大大降低了污染物的水平。
〉PUREfrex®2.0试剂盒组成
试剂 | 体积 | 组分说明 |
Solution I | 125 µL | 氨基酸, NTPs, tRNAs和酶底物等 |
Solution II | 12.5 µL | 蛋白质（30%甘油缓冲液中） |
Solution III | 25 µL | 核糖体（20 µM） |
DHFR DNA | 10 µL | 含有大肠杆菌二氢叶酸还原酶(DHFR)基因的PCR产物作为阳性对照。(20 ng /µL) |
产品列表
产品名称 | 规格 | 总反应体积 |
试剂盒 |
PUREfrex®2.0 | GFK-PF201-0.25-EX | 250 μL |
GFK-PF201-0.25-5-EX | 250 μL×5 |
PUREfrex®2.1 | GFK-PF213-0.25-EX | 250 μL |
GFK-PF213-0.25-5-EX | 250 μL×5 |
PUREfrex®1.0 | GFK-PF001-0.25-EX | 250 μL |
GFK-PF001-0.25-EX | 250 μL×5 |
PUREfrex®补充试剂（请根据用途选择蛋白质合成反应液和添加剂） |
DnaK Mix | GFK-PF003-0.5-EX | 用于500ul的反应混合物 |
GroE Mix | GFK-PF004-0.5-EX | 用于500ul的反应混合物 |
DsbC Set | GFK-PF005-0.5-EX | 用于500ul的反应混合物 |
PDI Set | GFK-PF006-0.5-EX | 用于500ul的反应混合物 |
EF-P | GFK-PFS052-0.5-EX | 用于500ul的反应混合物 |
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