细胞培养中的微生物污染对于您的研究是一个严重和持续性的威胁。支原体、细菌和真菌的侵入可以杀死或彻底改变细胞培养，导致灾难性的结果，浪费时间和资源。这本手册(可联系欣博盛生物获取完整版)帮助您深入了解最有可能侵入您细胞培养的污染物，建立预防污染的良好操作规范，以及提供清除污染的解决方案。作为先天免疫和微生物学方面的专家，我们清楚知道这些污染物对于实验结果的威胁。虽然细菌和真菌污染一般肉眼可见，但支原体和内毒素污染不易被肉眼察觉，亦不会被一般光学显微镜观察到明显的特征变化。这些难以被检测到的污染物是一个严重的问题，因为它们可能导致数据被误解，许多已发表的研究可能已被涉及。因此，现在的学术期刊经常要求投稿作者检测细胞是否存在支原体和内毒素污染。此外，对于开发未来治疗方案的制药企业，细胞污染将严重损害它们的研究和声誉，造成难以负担的后果。在InvivoGen，我们追求卓越，致力为世界各地提供高质量的产品和无支原体污染细胞系。本指南将帮助您解决微生物污染每个阶段的问题，并指导您如何选择正确的InvivoGen产品来检测、清除和预防污染。

检测

防止及去除细胞污染的关键是尽早发现污染。基于微生物污染的性质，检测方法包括生物分析、PCR、荧光或化学染色、光学显微镜、比浊法、pH值测量或简单的目视检查。细菌和真菌通常可以通过光学显微镜识别。它们生长迅速，在48小时内（比如经过周末）即可达至肉眼可见的程度，被污染的培养基会显得浑浊或呈斑点状。随后，这些微生物可以用检测试剂盒进行鉴定。然而，支原体污染状态不能被一般肉眼和光学显微镜观察到，因此它们可能会在很长一段时间内不被注意到，并且只能通过专门的分析法来鉴定。不同的检测技术可以同时使用，以确保分析准确，特别是用于排除假阳性或阐明不确定的结果。

预防

了解微生物污染源对于减少细胞培养风险至关重要（见下文）。虽然不可能完全消除或隔离污染源，但您可以采取各种措施来预防污染。首先，确保您是在无菌环境中工作，并使用适当的无菌操作技术。第二，隔离任何从实验室外带进来的细胞，直到确认没有污染为止。第三，用光学显微镜和检测试剂盒定期监测细胞的情况。最后，您可以使用复合抗生素，例如InvivoGen提供的专为新培养细胞（原代细胞或克隆）预防难以检测的污染而设的配方。 

清除

一旦在细胞中检测到污染，通常的建议做法是丢弃细胞和培养基。然而，有时候我们会遇到一些不能废弃的珍贵细胞（如单克隆稳定细胞株、来源于移植组织的细胞系、原代细胞），而且没有任何冻存（如尚未制备冻存细胞）。

在这种情况下，可以使用InvivoGen提供的抗生素，在不损害细胞的情况下，快速、可靠地清除污染。

实验室常见微生物污染源

1. 基础设施:

通风柜、排风装置和实验室设备可以容纳表面微生物并传播空气微生物。

每天用酒精清洁工作区和每月用漂白剂清洁工作区。定期更换所有空气过滤器，并至少每周清空所有真空吸液器。

2. 操作员：

实验室工作人员可以将皮肤、衣服和身体上带有的微生物和灰尘传播到培养细胞中。

穿上合适的安全服，使用无菌技术。

3. 移液枪、枪头、注射器、

真空泵：受污染的移液枪可以污染多个细胞。

使用无菌移液枪、针头和注射器，不要重复使用一次性器具。确保定期清空和清洁真空泵储液罐和管路。

4. 设备： 

玻璃器皿、培养箱和水浴锅很容易被污染。

保持所有设备无菌，经常更换水浴锅中的水（这是真菌的温床）。定期对所有培养箱进行消毒。

5. 安全服：

实验袍和手套必须保持清洁干净，只能在实验室穿上跟戴上。

不重复使用一次性防护服，用后立即丢弃。

6. 培养基、试剂和细胞：

使用任何培养基、试剂或细胞之前，确认它们是无菌的。小心密封所有容器。

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