了解细胞培养污染,保护您珍贵的细胞!
检测
防止及去除细胞污染的关键是尽早发现污染。基于微生物污染的性质,检测方法包括生物分析、PCR、荧光或化学染色、光学显微镜、比浊法、pH值测量或简单的目视检查。细菌和真菌通常可以通过光学显微镜识别。它们生长迅速,在48小时内(比如经过周末)即可达至肉眼可见的程度,被污染的培养基会显得浑浊或呈斑点状。随后,这些微生物可以用检测试剂盒进行鉴定。然而,支原体污染状态不能被一般肉眼和光学显微镜观察到,因此它们可能会在很长一段时间内不被注意到,并且只能通过专门的分析法来鉴定。不同的检测技术可以同时使用,以确保分析准确,特别是用于排除假阳性或阐明不确定的结果。
预防
了解微生物污染源对于减少细胞培养风险至关重要(见下文)。虽然不可能完全消除或隔离污染源,但您可以采取各种措施来预防污染。首先,确保您是在无菌环境中工作,并使用适当的无菌操作技术。第二,隔离任何从实验室外带进来的细胞,直到确认没有污染为止。第三,用光学显微镜和检测试剂盒定期监测细胞的情况。最后,您可以使用复合抗生素,例如InvivoGen提供的专为新培养细胞(原代细胞或克隆)预防难以检测的污染而设的配方。
清除
一旦在细胞中检测到污染,通常的建议做法是丢弃细胞和培养基。然而,有时候我们会遇到一些不能废弃的珍贵细胞(如单克隆稳定细胞株、来源于移植组织的细胞系、原代细胞),而且没有任何冻存(如尚未制备冻存细胞)。
在这种情况下,可以使用InvivoGen提供的抗生素,在不损害细胞的情况下,快速、可靠地清除污染。
实验室常见微生物污染源
1. 基础设施:
通风柜、排风装置和实验室设备可以容纳表面微生物并传播空气微生物。
每天用酒精清洁工作区和每月用漂白剂清洁工作区。定期更换所有空气过滤器,并至少每周清空所有真空吸液器。
2. 操作员:
实验室工作人员可以将皮肤、衣服和身体上带有的微生物和灰尘传播到培养细胞中。
穿上合适的安全服,使用无菌技术。
3. 移液枪、枪头、注射器、
真空泵:受污染的移液枪可以污染多个细胞。
使用无菌移液枪、针头和注射器,不要重复使用一次性器具。确保定期清空和清洁真空泵储液罐和管路。
4. 设备:
玻璃器皿、培养箱和水浴锅很容易被污染。
保持所有设备无菌,经常更换水浴锅中的水(这是真菌的温床)。定期对所有培养箱进行消毒。
5. 安全服:
实验袍和手套必须保持清洁干净,只能在实验室穿上跟戴上。
不重复使用一次性防护服,用后立即丢弃。
6. 培养基、试剂和细胞:
使用任何培养基、试剂或细胞之前,确认它们是无菌的。小心密封所有容器。
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