AllView PAGE Buffer是一种新型的SDS-PAGE蛋白电泳缓冲液。这款缓冲液具有一个显著的特点就是能够在碱性的Laemmli凝胶(Tris-HCl)中分离不同分子量大小的蛋白质,类似于“梯度凝胶”的使用。建议使用丙烯酰胺浓度为6%的分离胶和3%的浓缩胶,以分离分子量约在10 kDa至250 kDa的范围的蛋白。电泳后的聚丙烯酰胺凝胶可直接用于CBB染色、银染或western印迹。
产品特点:
1. 节省成本和时间(不需要梯度凝胶)
2. 使用mini gel只需13分钟即可完成电泳
3. 适用于之后进一步的分析实验:例如CBB染色、蛋白质印迹等
操作步骤:
1. 用超纯水将20×的AllView PAGE Buffer稀释至1×工作液。(例如,取25 ml的AllView PAGE Buffer到475 ml 的超纯水中.)
2. 将凝胶放入电泳槽中。
3. 将1×AllView PAGE Buffer注入电泳槽中。
4. 点样以及加入蛋白marker
5. 开始电泳,电泳条件设置如下。
Gel | Voltage | Time |
Mini gel (8 × 10 cm, 1 mm thick) | 250 V (Constant voltage) | 13-15 min |
注意:
AllView PAGE Buffer适用于Laemmli凝胶(见下文“推荐用法”)。
如果使用预制凝胶,则最佳丙烯酰胺浓度可能不同。
AllView PAGE Buffer不可重复使用。
AllView PAGE Buffer是20×原液。使用前请稀释至1倍工作液。
如果观察到SDS沉淀,使用前将其放在水浴(约37°C)中使其完全溶解。
最佳电泳时间取决于丙烯酰胺浓度、凝胶大小和电压。
建议使用MW Marker作为标记。(e.g. DynaMarker® Protein MultiColor Stable II, Code#DM660).
推荐用法:
建议丙烯酰胺的浓度为6%的分离胶和3%的浓缩胶,以分离分子量大概10 kDa至250 kDa范围的蛋白。特别是在需要分离低分子量蛋白质(10kda~30kda)的情况下,建议使用10%的分离胶。
1. 准备胶 (Laemmli’s method)
表1,聚丙烯酰胺分离胶和浓缩胶配方(2 mini gels)
| Stacking gel (6 ml) | Resolving gel (15 ml) |
Gel percentage | 3% | 6% | 10% |
Ultrapure water | 3.9 ml | 8.05 | 6.05 |
1.5M Tris-HCl (pH8.8) | 1.5 | 3.75 | 3.75 |
30% Acrylamide/Bis solution | 0.6 | 3.0 | 5.0 |
10% SDS | 0.06 | 0.15 | 0.15 |
TEMED | 0.003 (3 µl) | 0.00375 (3.75 µl) | 0.00375(3.75 µl) |
10% APS | 0.06 | 0.05 | 0.05 |
上图为 DynaMarker® Protein MultiColor Stable II, Code#DM660
2.电泳图
AllView PAGE Buffer与Laemmli electrophoresis running buffer(Tris-Glycine-SDS)的使用区别在于蛋白质迁移率不同。通过对AllView PAGE Buffer和Laemmli gel(Tris-HCl)的结合使用,可以像梯度凝胶一样分离大范围的蛋白质大小,如下图。
订购信息:
货号 | 产品名称 | 规格 |
DS520 | AllView PAGE Buffer | 500 ml (20 × stock solution) |
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